黑色素瘤細胞株是從一個經(jīng)過生物學鑒定的細胞系或原代培養(yǎng)物用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法,克隆具有特殊性質(zhì)或標志的單細胞獲得的細胞群,稱細胞株。細胞株的特殊性質(zhì)或標志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。描述一個黑色素瘤細胞株時,必須說明它的特殊性質(zhì)或標志。與細胞系類似,如果不能繼續(xù)傳代或傳代代數(shù)有限,可稱為“有限細胞株(finitecellstrain)”。如果可以連續(xù)傳代,則可稱為“連續(xù)細胞株(continouscellstrain)”。再由原細胞株進一步分離培養(yǎng)出與原株性狀不同的細胞群,可稱為亞株(substrain)??寺。╟lone)則為黑色素瘤細胞株的一種特殊情況,指由一個細胞增殖所形成的群體。
黑色素瘤細胞株是實驗中非常常用的一個細胞株,在生物制藥中使用也非常廣泛。該細胞株培養(yǎng)條件簡單,貼壁強度適中,比較容易轉(zhuǎn)染,很適合用它來研究一般哺乳動物基因的功能。
黑色素瘤細胞株對于更換培養(yǎng)基,應謹慎對待,更換培養(yǎng)基時,應留一瓶細胞使用推薦的培養(yǎng)基培養(yǎng),留作種子。更換培養(yǎng)基有兩種方法,zui簡單的方法是直接更換培養(yǎng)基,強制使細胞適應新的培養(yǎng)基;還有一種更溫和的方法:傳代細胞的時候分成細胞兩瓶,*瓶使用原來推薦的培養(yǎng)基,第二瓶使用50%原來推薦的培養(yǎng)基,50%新的培養(yǎng)基,之后仔細觀察黑色素瘤細胞株的生長狀態(tài),如果第二瓶細胞生長狀態(tài)不好,應立即停止更換培養(yǎng)基,如果第二瓶生長狀態(tài)好,可以繼續(xù)傳代分瓶,一瓶使用50%原來推薦的培養(yǎng)基,50%新的培養(yǎng)基,另一瓶使用25%原來推薦的培養(yǎng)基,75%新的培養(yǎng)基,繼續(xù)觀察,如果細胞狀態(tài)好,可以全部換成新鮮的培養(yǎng)基。
黑色素瘤細胞株在培養(yǎng)瓶長成致密單層后,已基本上飽和,為使細胞能繼續(xù)生長,同時也將細胞數(shù)量擴大,就必須進行傳代(再培養(yǎng))。傳代培養(yǎng)也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養(yǎng)細胞進行各種實驗的必經(jīng)過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以,而貼壁細胞需經(jīng)消化后才能分瓶。一般使用蛋白水解酶(比如胰蛋白酶)消化貼壁細胞成單個黑色素瘤細胞株,也可加入乙二胺四乙酸(EDTA)提高消化能力,EDTA是一種二價離子的螯合劑,能抑制細胞膜上的Ca2+和Mg2+。常用的細胞消化液一般含有0.25%(w/v)的胰酶和0.03%(w/v)EDTA,一般用不含Ca2+和Mg2+的鹽溶液配置,先用胰酶-EDTA消化液清洗細胞(5.0-10.0ml/75cm),然后棄去消化液,重新加入少量的胰酶-EDTA消化液(2.0to5.0ml/75sq.cmflask),觀察細胞直到細胞變圓脫離瓶壁,此過程一般需要5-15分鐘,為了避免細胞成團,消化細胞的過程中不要拍打細胞瓶。對于特別難消化的黑色素瘤細胞株,可以加入胰酶EDTA消化液后把細胞置于37°C促進消化,細胞脫離瓶壁后,立刻加入含有血清的*培養(yǎng)基中止消化,血清中某些蛋白質(zhì)能夠抑制胰酶的活性。一般情況下,離心并不需要。如果細胞需要無血清或者低血清的培養(yǎng)基,可以以125000g轉(zhuǎn)速離心5分鐘,然后棄去中止用的培養(yǎng)基,加入適合的新的培養(yǎng)基輕輕混勻細胞,移入到新的培養(yǎng)瓶。傳代的比例視細胞類型而定,一般是1:2-1:20,具體比例可參考說明書。胰蛋白酶會對某些黑色素瘤細胞株的細胞膜產(chǎn)生損傷,對于這種類型的細胞,可用細胞刮輕輕刮下細胞,加入適量的培養(yǎng)基,輕輕吹打混勻細胞,然后進行傳代培養(yǎng)。