ATCC細胞株原代培養(yǎng)舞經傳代成功即成細胞系，由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細胞世系所組成，通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物稱為細胞株。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。如果不能繼續(xù)傳代或傳代數(shù)有限，稱為有限細胞株如果可以連續(xù)傳代，稱為連續(xù)細胞株，對于人類腫瘤細胞，在體外培養(yǎng)半年以上，生長穩(wěn)定，并連續(xù)傳代的即可稱為連續(xù)性株或系。
ATCC細胞株建株的要點及基本過程
?。ㄒ唬┠[瘤細胞培養(yǎng)技術要點
1、取材：材料主要來源于外科手術或活檢瘤組織，取材時避免用壞死組織，要挑選瘤細胞集中和活力較好的部位，瘤性轉移淋巴結或胸腹水是較好的培養(yǎng)材料。取材后盡快培養(yǎng)，因故不能立即培養(yǎng)者，可凍存。其培養(yǎng)方法及凍存方法同前述正常組織。
2、成纖維細胞排除：在腫瘤組織中?；祀s有一些成纖維細胞，培養(yǎng)時能與瘤細胞同時生長，并常壓過癌細胞，導致癌細胞生長受阻以至消失，應仔細排除。
排除方法常有：機械刮除法、反復貼壁法、消化排除法、膠原酶消化法等。
3、提高腫瘤細胞培養(yǎng)存活率和生長率
根據(jù)實驗經驗，腫瘤細胞在體外不易培養(yǎng)，建立能傳代的腫瘤細胞系更為困難。一般當腫瘤組成或細胞被原代培養(yǎng)后，要經過對新環(huán)境的適應才能生長，因此不能局限于一般培養(yǎng)法，須采用一些特殊措施。如：用適宜底物，鼠尾膠原底層及飼細胞底層等。用細胞生長因子，根據(jù)細胞種類不同選用不同的促細胞生長因子，如胰島素、氫化可的松，雌激素等。也可以考慮動物媒介培養(yǎng)。
?。ǘ┤祟惲馨湍讣毎?strong>ATCC細胞株方法
l、4ml肝素抗凝血于離心管中，加入2ml RPMI 1640。
2、混勻后沿管壁緩慢加到預置有4ml淋巴細胞分離液的液面上靜置30min。
3、1500rpm，15min，吸取白細胞層（第二層）于另一離心管中。
4、加RPMI 1640 5ml洗滌白細胞兩次。
5、將白細胞接種至1ml RPMI 1640培養(yǎng)基中，加入10μl環(huán)胞霉素和100μl的EB（EB病毒）液，混勻。
6、水浴搖床，40次/分，37℃，3hr。
7、1500rpm，15min。將細胞接種至1ml培養(yǎng)基中（內含谷氨酰胺1mM／ml）加入10μl環(huán)胞霉素，輕輕混勻，37℃培養(yǎng)。
8、5天后觀察細胞轉化和生長情況，決定是否半量換液。一般半量換液l-2次，并維持環(huán)胞霉素的濃度。
9、待轉化細胞數(shù)量明顯上升，并出現(xiàn)細胞團塊后，可轉入25ml細胞培養(yǎng)瓶中，加1-2ml培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)10-15天，一般每隔3-4天觀察一次，決定是否換液，傳代。
10、細胞生長達一定數(shù)量后凍存，凍存前應進行核型分析和存檔。
建立什么樣的體外培養(yǎng)ATCC細胞株可被認可為己鑒定的細胞？視具體情況而定，無統(tǒng)一規(guī)定。對于用作原代培養(yǎng)的細胞只要供體均一，取材部位及組織種類等條件穩(wěn)定即可，如用做長期培養(yǎng)，特別是反復傳代的細胞，常需說明組織來源：細胞供體所屬物種，來自人體或者動物；個體性別、年齡；取材的器官或組織。如系腫瘤組織，應說明臨床和病理診斷，以及病歷號等。細胞生物學檢測，了解細胞一般和特殊的生物學性狀，如細胞一般形態(tài)，特異結構，細胞生長曲線和分裂指數(shù)，倍增時間，接種率等。如為腫瘤細胞，為說明來源于原腫瘤組織并保持惡性，須做軟瓊脂培養(yǎng)，異體接種致瘤和對正常組織侵潤力等實驗。培養(yǎng)條件和方法，應說明ATCC細胞株適應的生存環(huán)境，即指明使用的培養(yǎng)基、血清種類、用量以及適宜PH值。
